碳稀轉移酶對環(huán)丙烷化的立體選擇
Provivi已經(jīng)研究了亞鐵血紅素酶能夠催化卡賓轉移反應來(lái)生產(chǎn)手性環(huán)丙烷。一個(gè)與加州理工學(xué)院Frances Arnold實(shí)驗室合作的項目結果顯示一種新的、高效的用于手性環(huán)丙烷形成的立體選擇酶。這研發(fā)案例所創(chuàng )造的是一個(gè)在自然界中原來(lái)不存在的酶催化化學(xué)反應。
替格瑞洛(下圖所示)是一種用于中風(fēng)后預防血栓的心血管藥物。高手性純度的非對映異構體ethyl-(1R,2R)-2-(3,4-difluorophenyl)-cyclopropanecarboxylate是合成替格瑞洛的一種關(guān)鍵中間體,可以通過(guò)酰胺形成和霍夫曼重排轉化為相應的胺。
Provivi/Caltech團隊開(kāi)始通過(guò)定向進(jìn)化創(chuàng )造一個(gè)碳烯轉移酶,能夠生產(chǎn)目標的高純度非對映異構體,如下圖所示。
在晶體結構的指導下,來(lái)自枯草芽孢桿菌的血紅蛋白截斷片段通過(guò)迭代突變和篩選,鑒別出了一個(gè)含有四突變的突變體,能夠以3,4-difluorostyrene為底物獲得所需的非對映異構體,達到99%選擇性和90%收率。這個(gè)酶的總轉換數>12000,部分結果已經(jīng)發(fā)表?!綧cIntosh, J. A.; Arnold, F. H., Highly Stereoselective Biocatalytic Synthesis of Key Cyclopropane Intermediate to Ticagrelor. ACS Catalysis 2016, 6(11), 7910-7913】
這個(gè)研發(fā)工作的創(chuàng )新之處,在于不是針對已知的生物催化反應進(jìn)行開(kāi)發(fā),而是對全新的反應開(kāi)發(fā)了高效的生物催化劑。
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